胰島自身抗體是1型糖尿病(T1D)的特異性血清學(xué)標(biāo)志物,是臨床醫(yī)生確定臨床分型、預(yù)測胰島素治療需求、識別有T1D風(fēng)險的受試者的重要工具,也是觀察性研究(如(TEDDY)[9]、BABYDIAB[10]和TrialNet[11])的終點。TEDDY研究已證實胰島素自身抗體(IAA)是2歲以下新發(fā)T1D兒童相關(guān)性最高的抗體,而谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)更多見于2歲以上新發(fā)患者[9]。
用于自身抗體聯(lián)合測定的ELISA特別適用于人群篩選需求,只有在聯(lián)合檢測中結(jié)果為陽性的樣本才需要進(jìn)一步檢測單項自身抗體,從而減少成本、時間、人力資源和環(huán)境影響。RSR公司的3 Screen ICA™用于谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)、酪氨酸磷酸酶抗體IA-2 (IA-2A)和鋅轉(zhuǎn)運蛋白8 抗體(ZnT8A)的聯(lián)合檢測,2 Screen ICA™用于GADA和IA-2A的聯(lián)合檢測。這兩款產(chǎn)品均參與了糖尿病自身抗體標(biāo)準(zhǔn)化計劃(DASP)和國際自身抗體標(biāo)準(zhǔn)化計劃(IASP)組織的性能評估。
本研究的主要目的是評估3 Screen ICA™和2 Screen ICA™在瑞典人群樣本中的靈敏度和特異性,以期在未來進(jìn)行篩查研究。此外,該研究還評估了IAA和ICA是否有助于提高靈敏度,以進(jìn)行了RBA和ELISA法在GADA、IA-2A和ZnT8A檢測上的一致性評價。
材料和方法
1. 患者分組:
T1D組:納入100例瑞典T1D的患者,其中,93例患者在確診當(dāng)天進(jìn)行了血樣采集,3例患者在診斷后一天內(nèi)進(jìn)行了采樣,4例患者的T1D病程時間未知。在該研究組中,50例患者為15歲以下兒童(中位年齡8.8歲;范圍2.3 - 14.7;男/女: 27/23=1.17),50例為青少年和成人(中位年齡16.5歲;范圍15.1 -41;男/女: 32/18 = 1.78)。
健康對照組:納入200名健康對照,包括100名兒童和100名成人。對照組兒童的中位年齡為12.6歲,范圍為11.9-13.6,男/女: 50/50=1.00;成人中位年齡42.5歲,范圍21 - 65,男/女:59/41=1.44。
2. 檢測方法
ELISA:酶聯(lián)免疫法;RBA:放射免疫法;IF:免疫熒光法
結(jié)果
RBAs、ICA-IF和ELISA的結(jié)果匯總見表1和表2。3 Screen的靈敏度為93%,特異度為97.5%;2 Screen的靈敏度為91%,特異度為98.5%。93例初篩陽性患者中,多數(shù)為多種自身抗體陽性,其中72%(67/93)同時為GADA和IA-2A陽性,57%(53/93)為三種自身抗體(GADA、IA-2A和ZnT8A)陽性。在T1D篩查陰性的7例中,僅有1例呈GADA ELISA單項檢測陽性。
在健康對照中,僅有1例(0.5%)存在多種自身抗體(IA-2A和ZnT8A)陽性。
在13例T1D患者和2名健康對照中IAA呈陽性。
表1 100例1型糖尿病患者的胰島β細(xì)胞特異性自身抗體結(jié)果
表2 200名健康對照的胰島β細(xì)胞特異性自身抗體結(jié)果。
IA-2A RBA的靈敏度為78%。GADA RBA的加入提高了12%靈敏度,將該方法學(xué)整體靈敏度提高至90%,而ZnT8A RBA (R/W/Q中的任何一種)的加入使靈敏度進(jìn)一步提高到 91%。相比之下,添加IAA和ICA-IF結(jié)果并沒有比使用其他檢測方法獲得更高的靈敏度(表1)。
2 Screen和3 Screen兩種檢測方法最一致(Kappa=0.97)。IA-2A RBA和IA-2A ELISA兩種檢測方法的一致性最好(Kappa=0.96)。
討論
研究者采用了6種RBA、1種IF和5種ELISA對100名T1D患者和200名健康對照的胰島β細(xì)胞特異性自身抗體進(jìn)行了檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)3 Screen方法表現(xiàn)優(yōu)異,其靈敏度(93%)和特異性(97.5%)最高。2 Screen和3 Screen的檢測靈敏度優(yōu)于任何RBA。
相比于放免法,GADA ELISA擁有更高的檢出率(84% vs 77% GADA RBA),大多數(shù)(76%)患者在兩種GADA檢測方法中均呈陽性,而8例患者僅通過ELISA檢測為GADA陽性,1例僅通過GADA RBA檢測為GADA陽性。
相比于放免法(61%),ZnT8A ELISA (ZnT8R和ZnT8W變體)可在更多(75%)T1D患者中檢測出陽性。IA-2A ELISA和RBA鑒定出相同數(shù)量(78%)的陽性患者。
3 Screen適用于人群篩查。除免疫項目常用的血清樣本外,經(jīng)Ca2+處理的EDTA血漿也可以得到可靠的結(jié)果[24,25]。在樣品中加入血紅蛋白、生物素、脂肪乳劑或膽紅素對結(jié)果沒有顯著影響,這表明該檢測不容易受到這些物質(zhì)的干擾。
綜上所述,本研究顯示了3 Screen優(yōu)異的性能,具有較高的檢測靈敏度和特異性,可用于健康人群中對三種自身抗體(GADA、IA-2A和ZnT8A)的初步篩查。在3 Screen篩查陽性的情況下,需進(jìn)一步對抗體進(jìn)行單項檢測,以識別具有進(jìn)展為T1D高風(fēng)險的多重自身抗體陽性患者。經(jīng)3 Screen篩查試驗陰性的樣本通常不需要進(jìn)一步檢測。此外,對兩歲以下兒童進(jìn)行IAA檢測也是有必要的。因此,3 Screen + IAA的測試策略更適合非常年幼的兒童。
參考文獻(xiàn):T?rn C, Vaziri-Sani F, Ramelius A, Elding Larsson H, Ivarsson SA, Amoroso M, Furmaniak J, Powell M, Smith BR. Evaluation of the RSR 3 screen ICA™ and 2 screen ICA™ as screening assays for type 1 diabetes in Sweden. Acta Diabetol. 2022 Jun;59(6):773-781.